技术服务

TECHNICAL SERVICES

免疫沉淀

IP&Co-IP

免疫沉淀及免疫共沉淀
服务内容
1.温和条件下进行蛋白抽提,BCA定量,调整蛋白浓度
2.样品预处理:用Protein A/G Sepharose孵育
3.样品与IP抗体进行孵育
3.洗涤Protein A/G Sepharose-Antibody-Protein Complex,并对免疫复合物进行变性处理
4.沉淀产物SDS—PAGE或者WB鉴定(目前暂无其它鉴定)
5. Western blot检测
1电泳:聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)分离蛋白样品
2湿法转印(BLOTINGTank Transfer
3杂交:用抗体鉴定膜上的特定蛋白(INCUBATION: Antibody
4化学发光检测(ECL),胶片曝光,ImageQuant TL软件读取IOD值(可选)
6.预实验及正式实验服务
 
样品要求(样品处理及保存见附件)
1.细胞>1×107;组织>100mg;细菌湿重>50mg;植物>100mg;血清>50ul
2.样品蛋白浓度>1mg/ml,蛋白量>200ug/样品
 
收费标准

 

 

服务项目
收费标准¥
实验周期
免疫沉淀
7500/基因
3-4
免疫沉淀+可曝光marker
7800/基因
3-4
免疫共沉淀
8300/基因
3-4
免疫共沉淀+可曝光marker
8600/基因
3-4
ImageQuant TL读取条带IOD值及计算
!

 

客户提供材料
新鲜或正确保存的样品
目的蛋白一抗
阳性对照样品(尽量提供)
相关文献(可选)
 
提交给客户结果
1、预实验曝光结果(胶片及扫描图),预实验采取2个一抗稀释度
2、正式实验曝光结果(胶片及扫描图)
3、完整实验报告
4IOD值分析报告(可选)
 
服务说明
1.待检测样品可以是待检测蛋白样品,也可以是细胞、组织等其他样品;
2.免疫沉淀用抗体;
3.检测用抗体。
对照设置
空白:无抗体,只有protein A/G
阴性对照:无蛋白,有抗体及protein A/G
阴性对照:未转染细胞或者基因敲除样品
无关空白抗体
 
 
 
应用实例
 
附:样品处理及保存(极为重要)
1、悬浮细胞样品:把细胞及培养液一起收集到15ml或者50ml离心管中,1500rpm离心3min,弃去上清;加入PBS轻轻吹打,1500rpm离心3min,弃去上清;反复3次,弃去上清后于-80度或者液氮冻存待用。在避免冻融的情况一般保存1年,建议尽快检测。
2、贴壁细胞样品:
2.1胰酶消化:用胰酶将细胞消化后,收集到15ml或者50ml离心管中,1500rpm离心3min,弃去上清;加入PBS轻轻吹打,1500rpm离心3min,弃去上清;反复3次,弃去上清后于-80度或者液氮冻存待用。在避免冻融的情况一般保存1年,建议尽快检测。
2.2细胞刮子收集细胞:对于某些蛋白(即对胰酶比较敏感或者实验特殊要求,如E-Cadherin不易用胰酶消化后进行WB检测),直接用细胞刮子刮下细胞,收集到EP15ml或者50ml离心管中,1500rpm离心3min,弃去上清;加入PBS轻轻吹打,1500rpm离心3min,弃去上清;反复3次,弃去上清后于-80度或者液氮冻存待用。在避免冻融的情况一般保存1年,建议尽快检测。
3、动物组织样品:取下合适的动物或者人的组织样品后用预冷的PBS或者生理盐水漂洗,尽量除尽残留血液,用滤纸把多余PBS吸取干净。把组织分成约50mg大小(依据实验目的需要进行调整),用锡纸分别包装好或者用冻存管装好,于-80度或者液氮中保存。在避免冻融的情况一般保存1年,建议尽快检测。
4、植物样品:取得待测植物样品后,用蒸馏水把泥土漂洗干净,用滤纸把多余水分吸取干净,分装成合适大小于-80度或者液氮中保存。在避免冻融的情况一般保存1年,建议尽快检测。
5、细菌样品:细菌培养完成后,10000rpm离心5min收集细菌,加入PBS吹打,10000rpm离心5min,弃去上清;反复3次,弃去上清后于-80度或者液氮冻存待用。
6、若要检测磷酸化蛋白,请在3个月内进行。长时间保存样品容易使磷酸化蛋白去磷酸化而检测不到磷酸化条带。
7、提取胞浆、胞核蛋白的样品应尽量采用新鲜样品,冻存样品提取的胞核蛋白可能会减少。
8、血液样品(血浆中蛋白):3000rpm离心20min后收集上清,分装后于-80度或者液氮冻存待用。3个月以内检测。
9、长距离运送样品时采用干冰或者液氮。
10、样品的实际需要量请打电话咨询。
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