蛋白印迹膜再生液(WB Stripping Buffer)
简介
本产品可以在不显著影响抗原量的情况下,去除结合在印迹膜上的一抗和二抗。无需反复电泳和转膜,节省样品和时间,使同一张膜可进行多次目的蛋白的检测。本产品适用于使用NC膜或PVDF膜进行Western Blot检测。
操作步骤
1. 将标记有HRP的抗体用ECL发光、曝光后的膜取出,加入适当量的再生液(再生液充分覆盖膜表面,8.5cm╳5.5cm膜加入15ml左右再生液),室温振摇孵育30min左右(孵育时间应根据不同的目的蛋白来调整:对于表达量较高的蛋白,使用再生液时可以延长孵育时间至1h或者在37度孵育30min);
2. 弃去再生液,用15ml缓冲液(PBST或TBST)洗膜3次,每次5min,室温振摇;
3. 检测HRP标记二抗洗脱是否完全,此时可以用ECL孵育、曝光来确定二抗是否洗脱掉;
4. 第三步可以省略,直接进行第五步操作;
5. 待检测完毕,确认膜上无残留的酶活性后,将膜进行封闭,室温30min或者4度封闭过夜;
6. 重新加入待测目的蛋白一抗,进行下一轮的WB实验。